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 ?     通過SDS-PAGE和動(dòng)態(tài)光散射（DLS）可有效判斷大鼠白介素13單克隆抗體是否發(fā)生聚集，兩種方法分別從分子量偏移和粒徑分布角度提供證據(jù)?。

 一、SDS-PAGE 法檢測(cè)聚集（還原與非還原條件對(duì)比）

SDS-PAGE 可通過觀察條帶位置和數(shù)量變化判斷是否存在共價(jià)聚集，尤其適用于檢測(cè)由二硫鍵介導(dǎo)的穩(wěn)定聚集體。

 操作要點(diǎn)：

?樣品處理?：將抗體樣品分為兩組，一組加入β-巰基乙醇或DTT（還原條件），另一組不加（非還原條件）。

?電泳條件?：使用4–12% Bis-Tris凝膠，150 V恒壓電泳至染料前沿到達(dá)底部。

?上樣量?：建議每孔加載 ?2–5 µg 抗體?，確保信號(hào)清晰可辨。

動(dòng)態(tài)光散射（DLS）法檢測(cè)聚集（溶液狀態(tài)實(shí)時(shí)分析）

DLS 是一種無需標(biāo)記、快速評(píng)估蛋白質(zhì)粒徑分布的技術(shù)，特別適合檢測(cè)溶液中微量聚集物。

 操作要點(diǎn)：

?樣品準(zhǔn)備?：取 ?10–20 µL 抗體溶液?（濃度0.5–1 mg/mL），用PBS緩沖液稀釋，避免氣泡。

?測(cè)量角度?：推薦使用 ?90°或反向散射角? 進(jìn)行檢測(cè)，以提高對(duì)小粒子的靈敏度 。

?溫度控制?：設(shè)定為 ?25°C?，平衡5分鐘后開始測(cè)量。

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